1988年，中国艺术节在北京举行，上海人艺参演的剧目是《中国梦》，奚美娟担任女主角，夺得中国戏剧梅花奖。

1990年，参演首部电影《假女真情》，获得第十一届中国电影金鸡奖最佳女主角奖。

1992年7月，在电影《蒋筑英》中饰演蒋筑英的妻子路长琴。

1998年6月，与周迅主演根据毕淑敏同名小说改编的电视剧《红处方》，饰演沈若鱼一角。

2000年6月，主演反腐题材电视剧《红色康乃馨》，奚美娟以反面人物形象出现，在剧中饰演大华集团董事长蓝思红。2001年，主演电视剧《再婚家庭》。

2004年2月，与贾一平、王茜主演电视剧《坐庄》，凭借《坐庄》获得第五届金鹰艺术节“观众喜爱的电视剧女演员”奖；同年，担任第24届中国电影金鸡奖评委。

2008年，在电视剧《春草》中，奚美娟一改以知性形象，扮演一个农村母亲；7月，参演反映汶川地震的纪实性电视连续剧《震撼世界的七日》；在海清、林永健主演的电视剧《王贵与安娜》中饰演安娜的母亲；12月，参演黄海波主演的谍战剧《黑三角》，饰演反派角色“于黄氏”。

2010年9月，在张艺谋电影《山楂树之恋》中饰演静秋的母亲；2011年4月，参演贾一平主演的年代商战剧《大浴堂》

2012年，与宋春丽、陈瑾主演反映国共内战电视剧《大地情深》。

2013年11月，参演赵宝刚执导的都市情感话题剧《老有所依》在浙江、东方、北京、天津四大卫视播出，奚美娟饰演慈母谢亚芝。

2016年，参演的电影《杠上开花》上映。

2020年2月21日，参演的都市剧《安家》播出；5月28日，其出演的刑侦剧《燃烧》开播，在剧中饰演龙星集团的董事会主席赵月娥；9月，入围第七届中国电视好演员奖红组女演员名单。10月20日，由中国视协演员工作委员会主办的第七届“中国电视好演员”网络投票结果公布，奚美娟获得中国电视好演员优秀演员（红组男演员）；11月10日，由赵薇发起的国内首部女性独白剧《听见她说》官宣阵容，白百何、郝蕾、齐溪、王智、奚美娟、杨紫、咏梅、杨幂分别加入8集单元剧演出。

2021年6月11日，出演由侯咏执导的电影《望道》发布“火浪版”海报并正式宣布主创阵容。